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蛋白质双向电泳分离

       双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE
分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。
                             
                             
1、双向电泳技术应用过程中的关键步骤
a. 样品制备(蛋白提取)
(1) 细胞培养、处理和收集;
(2) 将细胞在IEF裂解缓冲液中溶解;
(3) 将样品离心以去除不溶的细胞碎片和DNA,提取上清,-80 ℃保存。
b. 蛋白质定量和上样
(1) 固相PH梯度干胶条(Immobi-line PH Gradient ,IPG)水化、等电聚焦;
(2)IPG的平衡;
(3)SDS-PAGE;
(4) 蛋白质检测:考马斯亮兰染色或银染色。
c. 图像分析及数据处理
将染色后的凝胶放在GS-710光密度扫描仪上,扫描后的图像用PDQUEST 2D软件分析,选择部分匹配的蛋白质
斑点进行比较。
2、IPG的优点
a.PH梯度稳定、聚焦准确、精度高;
b. 无阴极漂移、碱性蛋白丢失的现象;
c. 蛋白上样量大,可提高低含量成分的分辨效果;
d. 样品中的盐的干扰少,无边缘效应;
e.PH梯度、分离结果重现性好。
3、在双向电泳应用中所面临的问题
许多疏水性蛋白质(如膜蛋白)不溶于样品缓冲液,分子量过大(>200kD)极端酸性或碱性蛋白在电泳
过程中易丢失,2DE不能分辨。低含量组分易被高含量组分遮蔽,降低分辨率。蛋白在提取和消化过程中
的丢失、凝胶的污染、在不影响分辨率情况下的上样量等等。
4、双向电泳在医学研究中的应用
a. 人类疾病的蛋白质组研究
b. 致病微生物的蛋白质组研究
 
 
北京中昊时代生物技术中心与北京大学签约合作,凭借多年分子生物学实践经验及稳定的技术操作,拥有

国内最专业的世界水平的蛋白组学技术实验室,并且在临床应用方面与多家高等院校、科研院所和医药公
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